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이매스교육 및 공지사항

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  • 제목

    [HPLC] HPLC Troubleshooting : peak problem, Retention time change, High pressure
  • 작성자

    이매스
  • 첨부파일

 

High pressure

현상

원인 및 해결책

Column Contaminaton

Column이 오염되거나 수명이 다란 경우 압력이 높아 질 수 있음

Column 구입 시 받은 성적서와 같은 방법으로 column의 이론단수 및 Retention time을 통해 column의 상태를 알 수 있음

Guard column을 사용하는 경우 Guard column의 오염을 의심해 볼 수 있음

 No Peaks

현상

원인 및 해결책

Inject problem

잘못된 vial

잘못된 injection

Needle 손상으로 인한 leak 발생

 Broad Peaks

현상

원인 및 해결책

Sample overload

시료 주입하기 전 희석해서 주입

시료마다 특성에 의해서 농도별, 주입량별로 피크 모양 다를 수 있음

Blockage column inlet

컬럼 inlet 부분이 파손되어 앞부분 피크가 영향을 받을 수 있음

Late elution peak

늦게 나오는 피크를 인지하지 못하고 다음 시료가 들어갔을 때 이전 피크에 영향을 줄 수 있음

 Split Peaks

현상

원인 및 해결책

Sample solvent too strong

시료를 녹인 용매를 이동상으로 희석하거나 이동상보다 약한 이동상으로 녹여서 주입

 Fronting Peaks

현상

원인 및 해결책

Inject disrupting equilibrium

시료를 녹인 용매를 이동상으로 희석하거나 이동상보다 약한 이동상으로 녹여서 주입

Column voiding

Column 교체

 Tailing Peaks

현상

원인 및 해결책

Column ‘secondary interaction’

이동상을 변경하여 실험 (부가적인 반응을 억제 할 수 있는 시약을 넣어서 실험 하거나 이동상의 pH를 변경하여 실험)

Extra column volume

Extra column volume에 따라 Tailing Peaks가 생길 수 있음

 Retention Time

현상

원인 및 해결책

Solvent preparation

이동상은 가능한 깨끗한 상태여야 하고 이동상에 녹아있는 기체를 제거하고 사용

오래된 용매를 사용해서 RT에 변화가 생겼다면 새로운 용매를 제조해서 system column에 모두 안정화 한 다음 사용

Solvent delivery system blockage

용매라인과 inlet-filter 부분을 체크

System leaks

Fitting union들의 leak 체크

Solvent blending problem

용매의 상호간 섞임성 체크

용매의 섞임성 표 참고